本試劑盒僅限于科學(xué)研究用途，嚴(yán)禁用于醫(yī)學(xué)診斷。本文將介紹人巨噬細(xì)胞炎性蛋白5 (MIP-5) 的ELISA試劑盒的使用原理和具體操作。

檢測(cè)原理

本試劑盒采用雙抗體一步夾心法的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，首先將樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體依次加入預(yù)先固定有adropin（AD）抗體的微孔中。經(jīng)過(guò)適當(dāng)溫育后，進(jìn)行徹底的洗滌步驟。利用底物TMB顯色，在過(guò)氧化物酶的催化下，TMB由藍(lán)色轉(zhuǎn)化為最終黃色，顏色的深淺與樣品中的adropin（AD）濃度呈正相關(guān)。隨后，使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），并計(jì)算樣品的濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：需使用無(wú)熱源和內(nèi)毒素的試管，操作時(shí)避免任何細(xì)胞刺激。收集血液后，進(jìn)行3000轉(zhuǎn)離心10分鐘，迅速并小心地分離血清與紅細(xì)胞。

2. 血漿：采用EDTA、檸檬酸鹽或肝素作為抗凝劑，再進(jìn)行3000轉(zhuǎn)離心30分鐘以獲取上清液。

3. 細(xì)胞上清液：將樣品進(jìn)行3000轉(zhuǎn)離心10分鐘，以去除顆粒及聚合物。

4. 組織勻漿：將組織與適量生理鹽水混合并搗碎，然后進(jìn)行3000轉(zhuǎn)離心10分鐘以提取上清液。

5. 保存：若樣本未能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)將其分裝為一次用量并儲(chǔ)存于-20℃，避免反復(fù)凍融。解凍時(shí)請(qǐng)?jiān)谑覝叵虏僮鳎_保樣本徹底均勻解凍。

操作注意事項(xiàng)

本試劑盒包含標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5），其濃度依次為：0、25、50、100、200、400 pg/mL。

試劑的準(zhǔn)備：20×洗滌緩沖液需用蒸餾水按1:20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品的線性回歸曲線，并按照曲線方程計(jì)算各樣本的濃度值。

注意：本試劑盒具有特定性能，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀所有使用說(shuō)明，并遵循操作規(guī)范。同時(shí)，推薦使用尊龍凱時(shí)品牌的試劑以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。