尊龍凱時(shí)?BBcellProbe?細(xì)胞膜染色試劑DiI(BB-441916)是一種橙色熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜探針,最大的激發(fā)波長(zhǎng)為549nm,發(fā)射波長(zhǎng)為565nm。該試劑專為細(xì)胞膜染色而設(shè)計(jì),能夠有效地與膜結(jié)構(gòu)中的脂質(zhì)分子結(jié)合,適用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和進(jìn)行細(xì)胞定位分析。
由于其出色的染料維持性,DiI能夠提供強(qiáng)而穩(wěn)定的橙紅色熒光(Ex/Em=549/565nm),同時(shí)與綠色熒光染料和蛋白質(zhì)具備良好的熒光分辨率,適合于多重指標(biāo)染色的應(yīng)用。
當(dāng)親脂性的熒光探針DiI進(jìn)入細(xì)胞膜后,會(huì)在細(xì)胞膜上擴(kuò)散,最佳濃度下可實(shí)現(xiàn)在整個(gè)細(xì)胞膜的染色。在進(jìn)入細(xì)胞膜之前,染色液的熒光強(qiáng)度極低;但一旦與細(xì)胞膜結(jié)合,其熒光強(qiáng)度會(huì)顯著增強(qiáng),并在激發(fā)后發(fā)出明亮的橙色熒光,具有較高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。
熒光探針DiI通常不會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力產(chǎn)生顯著影響,因此被廣泛用作活細(xì)胞、固定細(xì)胞及神經(jīng)組織的正向或逆向示蹤劑。此外,DiI還可以用于細(xì)胞融合與粘附的檢測(cè)、發(fā)育或移植過(guò)程中的細(xì)胞遷移追蹤,并通過(guò)熒光恢復(fù)后漂白(FRAP)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)脂質(zhì)在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散。它還可用于細(xì)胞毒性檢測(cè)和脂蛋白標(biāo)記。
根據(jù)使用情況,在工作濃度下,此染料不會(huì)對(duì)細(xì)胞活力和增殖能力產(chǎn)生毒性影響,這一點(diǎn)使其在生物醫(yī)學(xué)研究中尤為重要。
為了使用DiI進(jìn)行細(xì)胞染色,首先需準(zhǔn)備染色工作液:根據(jù)樣本數(shù)量,將DiI探針用無(wú)血清培養(yǎng)基、HBSS或其他緩沖液稀釋至500-2500倍。接著對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌,增加染色工作液的體積以重懸細(xì)胞,并在37℃下孵育,最佳時(shí)間可從20分鐘開(kāi)始,隨后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行優(yōu)化,以達(dá)到均勻標(biāo)記的效果。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,同樣需用PBS洗滌兩次,再在細(xì)胞培養(yǎng)板或爬片上加入適量的染色工作液進(jìn)行孵育。待細(xì)胞染色完成后,需用預(yù)熱過(guò)的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多次洗滌,確保細(xì)胞表面的游離染料被清除,并最終用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)為549nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為565nm。
總之,尊龍凱時(shí)?BBcellProbe?細(xì)胞膜染色試劑DiI為細(xì)胞生物學(xué)研究提供了一種有效的工具,能夠幫助科研人員清晰觀察和分析細(xì)胞的行為與特性。